HyPer (Protein): Unterschied zwischen den Versionen

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'''HyPer''' ist eine [[Proteindesign|veränderte]] Variante des [[Grün fluoreszierendes Protein|grün fluoreszierenden Proteins]] (genauer: des YFP), bei der sich die [[Fluoreszenz]] [[Redox|redox]]-abhängig ändert.<ref>V. V. Belousov, A. F. Fradkov, K. A. Lukyanov, D. B. Staroverov, K. S. Shakhbazov, A. V. Terskikh, S. Lukyanov: ''Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide.'' In: ''[[Nature Methods]].'' Band 3, Nummer 4, April 2006, S.&nbsp;281–286, {{ISSN|1548-7091}}. {{DOI|10.1038/nmeth866}}. PMID 16554833.</ref>
'''HyPer''' ist eine [[Proteindesign|veränderte]] Variante des [[Grün fluoreszierendes Protein|grün fluoreszierenden Proteins]] (genauer: des YFP), bei der sich die [[Fluoreszenz]] [[Redoxreaktion|redox-abhängig]] ändert.<ref>V. V. Belousov, A. F. Fradkov, K. A. Lukyanov, D. B. Staroverov, K. S. Shakhbazov, A. V. Terskikh, S. Lukyanov: ''Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide.'' In: ''[[Nature Methods]].'' Band 3, Nummer 4, April 2006, S.&nbsp;281–286, {{ISSN|1548-7091}}. {{DOI|10.1038/nmeth866}}. PMID 16554833.</ref>


== Eigenschaften ==
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== Anwendungen ==
== Anwendungen ==
Das HyPer wird unter anderem als redox-abhängiger [[Biosensor]] und als [[Reporterprotein]] verwendet. Mit HyPer kann das Wasserstoffperoxid-abhängige [[Redox-Potential]] ''[[in vivo]]'' bestimmt werden.<ref name=Meyer_2007>{{cite journal |author=Meyer, A.J., Brach, T., Marty, L., Kreye, S., Rouhier, N., Jacquot, J.P., and Hell, R.|title= Redox-sensitive GFP in Arabidopsis thaliana is a quantitative biosensor for the redox potential of the cellular glutathione redox buffer. |journal=Plant J|volume=52 |issue=5 |pages=973–86 |year=2007 |doi= 10.1111/j.1365-313X.2007.03280.x|pmid= 17892447}}</ref><ref>S. G. Rhee, T. S. Chang, W. Jeong, D. Kang: ''Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells.'' In: ''Molecules and cells.'' Band 29, Nummer 6, Juni 2010, S.&nbsp;539–549, {{ISSN|0219-1032}}. {{DOI|10.1007/s10059-010-0082-3}}. PMID 20526816.</ref>
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Im [[Endoplasmatisches Retikulum|endoplasmatischen Retikulum]] kann mit HyPer die Bildung von Wasserstoffperoxid verfolgt werden.<ref>I. Mehmeti, S. Lortz, S. Lenzen: ''The H2O2-sensitive HyPer protein targeted to the endoplasmic reticulum as a mirror of the oxidizing thiol-disulfide milieu.'' In: ''[[Free Radical Biology and Medicine]].'' Band 53, Nummer 7, Oktober 2012, S.&nbsp;1451–1458, {{ISSN|1873-4596}}. {{DOI|10.1016/j.freeradbiomed.2012.08.010}}. PMID 22921589.</ref><ref>M. Exposito-Rodriguez, P. P. Laissue, G. R. Littlejohn, N. Smirnoff, P. M. Mullineaux: ''The use of HyPer to examine spatial and temporal changes in H2O2 in high light-exposed plants.'' In: ''[[Methods in Enzymology]].'' Band 527, 2013, S.&nbsp;185–201, {{ISSN|1557-7988}}. {{DOI|10.1016/B978-0-12-405882-8.00010-6}}. PMID 23830632.</ref>
 
Alternative optische Nachweisverfahren verwenden z. B. [[Resazurin]] (synonym AlamarBlue), [[Dichlorofluorescein]] (DCF) oder die Proteine [[roGFP]] oder [[rxYFP]].<ref>S. Pouvreau: ''Genetically encoded reactive oxygen species (ROS) and redox indicators.'' In: ''Biotechnology journal.'' Band 9, Nummer 2, Februar 2014, S.&nbsp;282–293, {{ISSN|1860-7314}}. {{DOI|10.1002/biot.201300199}}. PMID 24497389.</ref>


== Einzelnachweise ==
== Einzelnachweise ==

Aktuelle Version vom 19. Mai 2020, 21:40 Uhr

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GFP aus Aequorea victoria, Wildtyp-Form.

HyPer ist eine veränderte Variante des grün fluoreszierenden Proteins (genauer: des YFP), bei der sich die Fluoreszenz redox-abhängig ändert.[1]

Eigenschaften

HyPer ist ein Fusionsprotein aus cpYFP und dem Wasserstoffperoxid-sensitiven bakteriellen Protein OxyR.[2] Die Oxidation führt zu einer Spektralverschiebung der Absorption des HyPer von 420 nm zu 500 nm.

Anwendungen

Das HyPer wird unter anderem als redox-abhängiger Biosensor und als Reporterprotein verwendet. Mit HyPer kann das Wasserstoffperoxid-abhängige Redox-Potential in vivo bestimmt werden.[3][4] Im endoplasmatischen Retikulum kann mit HyPer die Bildung von Wasserstoffperoxid verfolgt werden.[5][6] Alternative optische Nachweisverfahren verwenden z. B. Resazurin (synonym AlamarBlue), Dichlorofluorescein (DCF) oder die Proteine roGFP oder rxYFP.[7]

Einzelnachweise

  1. ↑ V. V. Belousov, A. F. Fradkov, K. A. Lukyanov, D. B. Staroverov, K. S. Shakhbazov, A. V. Terskikh, S. Lukyanov: Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide. In: Nature Methods. Band 3, Nummer 4, April 2006, S. 281–286, ISSN 1548-7091. doi:10.1038/nmeth866. PMID 16554833.
  2. ↑ K. A. Lukyanov, V. V. Belousov: Genetically encoded fluorescent redox sensors. In: Biochimica et Biophysica Acta. Band 1840, Nummer 2, Februar 2014, S. 745–756, ISSN 0006-3002. doi:10.1016/j.bbagen.2013.05.030 (freier Volltext). PMID 23726987.
  3. ↑ Meyer, A.J., Brach, T., Marty, L., Kreye, S., Rouhier, N., Jacquot, J.P., and Hell, R.: Redox-sensitive GFP in Arabidopsis thaliana is a quantitative biosensor for the redox potential of the cellular glutathione redox buffer. In: Plant J. 52. Jahrgang, Nr. 5, 2007, S. 973–86, doi:10.1111/j.1365-313X.2007.03280.x, PMID 17892447.
  4. ↑ S. G. Rhee, T. S. Chang, W. Jeong, D. Kang: Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells. In: Molecules and cells. Band 29, Nummer 6, Juni 2010, S. 539–549, ISSN 0219-1032. doi:10.1007/s10059-010-0082-3. PMID 20526816.
  5. ↑ I. Mehmeti, S. Lortz, S. Lenzen: The H2O2-sensitive HyPer protein targeted to the endoplasmic reticulum as a mirror of the oxidizing thiol-disulfide milieu. In: Free Radical Biology and Medicine. Band 53, Nummer 7, Oktober 2012, S. 1451–1458, ISSN 1873-4596. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2012.08.010. PMID 22921589.
  6. ↑ M. Exposito-Rodriguez, P. P. Laissue, G. R. Littlejohn, N. Smirnoff, P. M. Mullineaux: The use of HyPer to examine spatial and temporal changes in H2O2 in high light-exposed plants. In: Methods in Enzymology. Band 527, 2013, S. 185–201, ISSN 1557-7988. doi:10.1016/B978-0-12-405882-8.00010-6. PMID 23830632.
  7. ↑ S. Pouvreau: Genetically encoded reactive oxygen species (ROS) and redox indicators. In: Biotechnology journal. Band 9, Nummer 2, Februar 2014, S. 282–293, ISSN 1860-7314. doi:10.1002/biot.201300199. PMID 24497389.
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